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新品推薦：植物組織線粒體形態/活性熒光染色試劑盒

 植物組織線粒體形態/活性熒光染色試劑盒產品說明書

主要用途

植物組織線粒體形態/活性熒光染色試劑是一種旨在通過長波長的熒光染料特異性地聚集在線粒體，并呈現紅色，用于分析和觀察線粒體活性與形態以及雙重染色或重疊染色定位的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于新鮮植物組織（例如根尖等）線粒體的形態觀察、活性探測和定位標記。產品嚴格無菌，即到即用，活體檢測，分辨率高，操作簡捷，性能穩定，滯留持久。

技術背景

線粒體是細胞中重要的細胞器，其主要功能是提供細胞內各種物質代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細胞中， 在光學顯微鏡下線粒體呈現為顆粒狀、棒狀或彎曲細線。線粒體熒光探針MitoTracker RED，是一種含有硫醇（Thiol）氯甲基基團的熒光染料，自由通過細胞膜，選擇性地聚集在線粒體。它可以對活細胞進行直接染色，在580nm波長可以清晰看到被染成紅色的線狀或顆粒小體的線粒體。并可以分析線粒體膜電位，以檢測線粒體活性。

產品內容

清理液（Reagent A）            100毫升

固著液（Reagent B）             50毫升

離析液（Reagent C）             20毫升

預備液（Reagent D）              1毫升

染色液（Reagent E）             10微升

產品說明書     1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；固著液（Reagent B）和離析液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于染色液配制的容器

載玻片：用于組織置放染色

解剖針：用于植物組織解剖

培養箱：用于染色孵育

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細胞熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent E）置入冰槽里融化，然后分別移出38微升預備液（Reagent D）和2微升染色液（Reagent E）到新的1.5毫升離心管，標記為染色工作液，并放在暗室里備用。然后進行下列操作。

方法一：活體染色

1． 加上100微升清理液（Reagent A）在載玻片上

2． 切取新鮮植物根尖，放進載玻片上的清理液（Reagent A）中

3． 用解剖針小心壓碎根尖

4． 小心移去清理液（Reagent A）

5． 小心加上1毫升清理液（Reagent A）在根尖上

6． 小心加入10微升含有預備液（Reagent D）和染色液（Reagent E）的染色工作液

7． 放進37℃培養箱里孵育20分鐘

8． 取出載玻片，移去染色液

9． 小心加上1毫升清理液（Reagent A）

10． 小心移去清理液（Reagent A）

11． 蓋上蓋玻片，用拇指小心且垂直加壓

12． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下進行觀察：激發波長579nm，散發波長599nm（線粒體呈現紅色）

方法二：固定染色

1． 加上100微升清理液（Reagent A）在載玻片上

2． 切取新鮮植物根尖，放進載玻片上的清理液（Reagent A）中

3． 用解剖針小心壓碎根尖

4． 小心移去清理液（Reagent A）

5． 小心加上2毫升固著液（Reagent B）

6． 室溫下，孵育3小時，避免干化

7． 小心移去固著液（Reagent B）

8． 小心加上1毫升清理液（Reagent A）

9． 小心移去清理液（Reagent A）

10． 小心加上1毫升離析液（Reagent C）

11． 室溫下孵育5分鐘

12． 小心移去離析液（Reagent C）

13． 小心加上1毫升清理液（Reagent A）

14． 小心移去清理液（Reagent A）

15． 小心加上1毫升清理液（Reagent A）在根尖上

16． 小心加入10微升含有預備液（Reagent D）和染色液（Reagent E）的染色工作液

17． 放進37℃培養箱里孵育20分鐘

18． 取出載玻片，移去染色液

19． 小心加上1毫升清理液（Reagent A）

20． 小心移去清理液（Reagent A）

21． 蓋上蓋玻片，用拇指小心且垂直加壓

22． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下進行觀察：激發波長579nm，散發波長599nm（線粒體呈現紅色）

注意事項

1． 本產品為20次操作

2． 操作時，須戴手套

3． 固著液（Reagent B）和離析液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全

4． 孵育時，必須避免光照

5． 建議染色完成后，即刻進行熒光檢測分析

6． 剩余的染色工作液可放進－20℃儲存備用

7． 本產品適合活體染色和固定染色，染色劑不易洗掉，染色持久

8． 根據不同組織類型，調整染色工作液的使用劑量（1：100至1：1000容量比），避免過度染色

9． 本公司提供系列線粒體分析試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定熒光清晰