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【病毒平臺】腺相關病毒
實驗原理
腺相關病毒(AAV)是 一種人細小病毒，目前因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。構建重組AAV(rAAV)涉及到用一個目的基因替換病毒基因組的大部分，然后將這個重 組基因組包裝到一個有感染性的病毒顆粒里。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒 (Ad)感染的培養細胞中。此方法的局限性包括(1) Ad輔助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低產出，(3)生成有復制能力的AAV。在此我們描述了新的輔助質粒(pH3和pH5)，排除了Ad共轉染的 需求。輔助質粒表達AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。當輔助質粒在沒有Ad感染的情況下共轉染到人293細胞中，rAAV載體產量超過了pAAV/Ad包裝質粒的80倍。另外，有 復制能力的AAV在rAAV制備過程中少于0.00125%。此系統的主要優點是(1)無需感染性的腺病毒(2)只使用兩個質粒就提高了轉染效率和載體的 產出。我們相信該雙質粒轉染系統因其簡便性和高產出而使AAV載體系統能被更廣泛地使用。該系統尤其將對多rAAV載體的臨床前分析有用。
實驗流程
實驗結果展示
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